无缝克隆的10 μl反应体系中，2-3 个组装片段总加入量建议在0.03-0.2 pmol，4-6 个组装片段总加入量建议在0.2-0.5 pmol。
计算线性化片段（包括载体和插入片段）的使用量，推荐以下计算公式：
线性化片段用量(ng)=皮摩尔数（pmols） × 碱基对数(bp）× 0.65 kDa
注：最优反应体系通常含有载体50-100 ng，各插入片段的摩尔数是载体的2-3倍。
任意输入两个参数：线性化片段的用量、pmols数、片段碱基对数，计算第三个参数结果。
（线性化片段）
（碱基对数）
| 计算结果 | 线性化片段质量 | pmols | 碱基对数 |
|---|---|---|---|
