产品简介
随机突变是阐述蛋白质结构和功能之间的关系、改进蛋白质性能的重要工具。StarMut 随机突变试剂盒基于易错 PCR（error-prone PCR）技术，利用 Taq DNA polymerase 不具有 3′→5′ 校对功能的特性，在特定的反应缓冲体系中，向扩增的目的基因中引入随机突变密码子。带有随机突变的扩增产物通过双酶切，连接到表达载体中构建文库，然后转化入表达宿主中，进行蛋白活性筛选。如果经一次突变反应不能获得满意的结果，可采用连续易错 PCR（sequential error-prone PCR）策略，即将一次 PCR 扩增得到的有用突变基因作为下一次 PCR 扩增的模板，连续反复地进行随机诱变，使每一次获得的突变累积而产生更有意义的突变。本试剂盒包含有优化的 2×StarMut Random System、StarMut Enhancer 和 Sterile Water 三种组分，使用时只需加入适量的 DNA 模板和合成的两条扩增引物，并用水补足体积，即可进行扩增反应，操作简便快速，大大减少了多次加样可能造成的出错和污染机会。2×StarMut Random System 含有优化浓度的 Taq DNA polymerase、dNTPs、反应缓冲液和稳定剂，可最大限度地克服常规易错 PCR 技术中，由于 Taq DNA polymerase 本身的偏爱性造成的以 GC 突变为主的缺点，获得相对均衡的突变谱。碱基突变率可通过适量添加 StarMut Enhancer、调整模板 DNA 量和改变 PCR 扩增循环数进行控制。
下表列出以 10 ng 质粒 DNA 为模板，PCR 扩增一条 1 kb DNA 片段（20个循环）后测序检测得到的突变率结果。需要注意的是，由于不同 DNA 模板的碱基组成不同、长度不一，以及不同引物的扩增效率存在差异，所以即使在相同的 PCR 反应条件下，两组 PCR 产物所得到的突变率也可能不同。因此我们建议根据实验的具体要求，首先进行多个小体系（20 μl）扩增预实验，分别加入不同体积的 StarMut Enhancer（如 0 μl、1μl、5 μl、10 μl 等），摸索出符合目标突变率的反应条件后，再放大扩增体系。其他影响突变率的因素见【注意事项】。
以 50 µl PCR 反应体系为例：
| 反应条件 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| StarMut Enhancer（μl） | 0 | 1 | 2.5 | 5 | 10 | 20 |
| 突变碱基的个数/1 kb | 0~1 | 0~3 | 0~4 | 1~6 | 3~10 | 5~18 |
| 平均突变碱基数/1 kb | 0.3 | 1.6 | 2.3 | 4.1 | 6.5 | 10.2 |
产品组分
| 组分货号 | 组分名称 | T115-01 |
|---|---|---|
| ZT115-101 | 2×StarMut Random PCR Mix | 500 μl |
| ZT115-102 | StarMut Enhancer | 400 μl |
| ZA129-101 | Sterile Water | 1 ml |
保存条件
-20℃ 保存，保质期 12 个月；经常使用，可于 4℃ 保存，保质期 3 个月。
产品变更
该产品原中文名称为：StarMut 随机突变试剂盒。自 2022.4.12 起变更为现用名。
请按照实际实验情况进行使用，如有疑问，请联系您的业务员或致电技术支持热线01069738797！
